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Part 1 of 1
La struttura del DNA fu determinata da Watson e Crick nel 1953: - Struttura Molecolare: Doppia elica destrorsa formata da due catene antiparallele di nucleotidi unite da legami fosfodiesterici tra il carbonio 3' di un desossiribosio e il 5' del successivo. Le basi azotate sono rivolte all'interno e appaiate secondo la regola di Chargaff ($A=T$ con 2 legami a idrogeno; $G equiv C$ con 3 legami a idrogeno). - Meccanismo di Duplicazione Semiconservativa: Dimostrato da Meselson e Stahl (1958): 1. L' elicasi srotola la doppia elica rompendo i legami a idrogeno nella fonte di replicazione (OriC). 2. Le proteine SSB (Single-Stranded Binding proteins) stabilizzano i singoli filamenti impedendone il riappaiamento, mentre la topoisomerasi (DNA girasi) allevia la tensione di superavvolgimento. 3. La primasi (RNA polimerasi) sintetizza un innesco (primer) di RNA di 10-15 nucleotidi. 4. La DNA Polimerasi III (negli eucarioti DNA polimerasi $delta$ e $epsilon$) sintetizza il nuovo filamento in direzione esclusivamente $5' ightarrow 3'$, leggendo il filamento stampo in direzione $3' ightarrow 5'$. 5. *Filamento Guida (Leading strand)*: sintetizzato in modo continuo verso la forcella replicativa. 6. *Filamento Ritardato (Lagging strand)*: sintetizzato in modo discontinuo in direzione opposta sotto forma di frammenti di Okazaki. 7. La DNA Polimerasi I rimuove i primer di RNA sostituendoli con DNA, e la DNA ligasi salda i nick fosfodiesterici rimanenti.
Worked example
Se un campione di DNA genomico contiene il 28% di citosina (C), per la regola di Chargaff conterrà il 28% di guanina (G). Il rimanente 44% è diviso equamente tra adenina (22%) e timina (22%).
For the exam
1.La DNA polimerasi sintetizza il nuovo filamento di DNA in direzione 3' -> 5'.
2.Un segmento di DNA con un elevato contenuto di coppie G-C richiede una temperatura di denaturazione (Tm) più elevata rispetto a uno ricco in A-T.
3.I frammenti di Okazaki vengono sintetizzati sul filamento guida in modo continuo.
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